Le contexte :
Le plateau d'imagerie MRI du campus Arnaud de Villeneuve propose depuis 2011 des solutions de microscopie superrésolution. Ce type de microscopie permet de distinguer des objets séparés d'une distance pourtant inférieure à la limite de résolution en microscopie optique. Dans le cadre d'IBDLR, le plateau s’est récemment équipé d’un nouveau microscope permettant l’imagerie d’échantillons à l’échelle nanoscopique en 2 et 3D. Nous avons opté pour la technologie STED qui vient compléter l’offre technologique de super-résolution d’ores et déjà présente sur le site (3D-SIM, TIRF, PALM, STORM).
L'équipement :
L’équipement retenu est un système de la gamme Expert Line, d’Abberior Instruments (http://www.abberior-instruments.com/products/expert-line). Sur la base d’un microscope inversé Olympus, Abberior Instruments a adapté l’imagerie confocale avec 4 lasers d’excitation (405, 485, 561 et 640nm) et un système de détection de fluorescence à haut rendement quantique sur 4 canaux (Photodiodes Avalanche). L’ensemble des fonctions du microscope ainsi que les déplacements de la platine sont motorisés. Plus spécifiquement, pour l’imagerie STED, le microscope est équipé d’un objectif 100X immersion huile de grande ouverture numérique. Le maintien précis de la position en z de l’échantillon durant l’acquisition d’images STED, crucial à ce niveau de résolution, est assuré par un module de compensation de dérive développé pour être fonctionnel en mode STED. L’unité STED est dotée d’un laser de déplétion impulsionnel à 775nm permettant l’imagerie à haute résolution de deux structures d’intérêt identifiées par des fluorophores adaptés tels que les Abberior STAR RED et STAR 580. Très prochainement, le système sera upgradé, avec le soutien de l'INCA, avec un second laser de déplétion à 595nm qui permettra en plus l’imagerie STED de marqueurs tels que l’Abberior STAR 488 ou la GFP et donc l’imagerie STED en 3 couleurs. A terme, l’imagerie d’échantillons vivants pourra aussi être réalisée, le microscope étant équipé d’une enceinte de régulation des paramètres de température, hygrométrie et oxymétrie. Le système bénéficie d’un développement breveté très récemment par Abberior qui a pour but de préserver la fluorescence de l’échantillon en gérant de façon dynamique la puissance laser appliquée à l’échelle de chaque pixel. Cette technologie réduisant l’exposition aux fortes puissances laser STED est particulièrement favorable à l’imagerie de préparations vivantes puisque limitant les effets néfastes de la lumière sur l’échantillon, mais permettra également de réduire le photo-blanchiment des préparations vivantes ou fixées aussi bien en imagerie STED qu’en imagerie confocal. Typiquement, ce microscope permet d’atteindre une résolution latérale inférieure à 30 nm (en STED 2D) et de l’ordre de 75 nm (STED 3D).
Applications :
Cette technologie réduisant l’exposition aux fortes puissances laser STED est particulièrement favorable à l’imagerie de préparations vivantes puisque limitant les effets néfastes de la lumière sur l’échantillon, mais permettra également de réduire le photo-blanchiment des préparations vivantes ou fixées aussi bien en imagerie STED qu’en imagerie confocal. Typiquement, ce microscope permet d’atteindre une résolution latérale inférieure à 30 nm (en STED 2D) et de l’ordre de 75 nm (STED 3D).Des acquisitions d’images STED multi-couleurs ont déjà pu être réalisées sur certains projets d’équipes que ce soit de l’IGH ou du CRBM. N’hésitez pas à venir solliciter l’équipe ou à prendre contact à Cette adresse e-mail est protégée contre les robots spammeurs. Vous devez activer le JavaScript pour la visualiser. afin de connaitre les conditions de préparations des échantillons.
