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Le contexte : 

Le plateau d’imagerie MRI du Campus Route de Mende propose différents types de microscopie confocale depuis 2012 : des microscopes purement d’imagerie confocale 3D classique, de l’imagerie multi-photonique équipée aussi d’un système FLIM et FCS et un microscope spinning disk dédié à l’imagerie du vivant. Dans le cadre de l’IBDLR, MRI a fait le choix de renforcer son parc de microscopes confocaux avec un nouvel équipement qui permettrait d’améliorer la résolution spatiale et la vitesse d’acquisition classique des systèmes à balayage laser.

 

L'équipement :

Le choix s’est porté sur le microscope confocal Zeiss LSM880 Fast Airyscan. Ce microscope est équipé de tous les éléments classiques d’un microscope confocal (les lasers (405nm, 488nm, 561nm, 647nm), des objectifs à air ou immersion, deux détecteurs PMTs classiques, un détecteur PMT GAasP pour la fluorescence et un détecteur PMT-trans pour la lumière transmise). La sélection spectrale se fait à l’aide d’un réseau et non pas par filtre. Se rajoute à cela un détecteur spécifique composé de 32 détecteurs organisés en nid d’abeille appelé Airyscan. Ce module permettra en fonction de la taille d’ouverture du pinhole d’acquérir simultanément 32 images qui combinées entre elles crééront une image « super-résolue ». La résolution attendue est alors de 170nm en XY et 500nm en Z.  Le rapport signal sur bruit est très significativement amélioré. Une imagerie confocale super-résolue ou non peut être obtenue très rapidement par l’option  « Fast Airyscan». Dans ces conditions, le laser d’excitation est élargi pour un équivalent de 4 lignes pixel en X et l’acquisition est donc 4 fois plus rapide. Ce système est piloté par le logiciel Zen et le traitement des images peut être dissocié de l’acquisition d’images. Une station d’analyse d’images est accessible à cet effet.

 

Applications :

Cette microscopie confocale à haute résolution peut être appliquée à tout type d’échantillon fixé ou vivant nécessitant une amélioration de résolution par rapport aux techniques classiques de microscopie confocale. Cette technologie est accessible avec les fluorophores classiques d’imagerie. Ce module de « super-résolution » est compatible avec l’imagerie du vivant. Il faut ajuster les bons paramêtres pour éviter une photo-toxicité ou un photo-blanchiement.

 

 

 

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