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Le contexte : 

Depuis 2010, le Pôle Protéomique de Montpellier (PPM) accueille une composante clinique, avec notamment un site au CHU de Montpellier (PPC-CHU). L'objectif de la PPC-CHRU est de mettre à disposition des équipes académiques et industrielles une expertise médicale, biologique et technique en Protéomique Clinique. En plus de la quantification absolue et l’identification par spectrométrie de masse de biomarqueurs cliniques (protéines, peptides, PTM, méthylation ARN, métabolomique ciblée), un panel d’immunodosages ultra-sensible simplex ou multiplex est également proposé grâce à deux technologies innovantes (détection de molécules uniques/ SIMOA Quanterix et Détection de molécules par électroluminescence/MesoScale Discovery)."

Les équipements et leur technologie :

Détection de molécule unique SIMOA :

Basé sur une toute nouvelle technologie révolutionnaire entièrement automatisée, le SIMOA (SIngle-MOlecule Array) propose une approche digitale qui permet la détection de molécules uniques dans tous types de matrices.

Avec une sensibilité de l’ordre du femtogramme/mL, cette approche est 1000 fois plus sensible que les technologies conventionnelles de détection de protéines de type ELISA analogique.

Les kits de dosage pour le SIMOA sont revendus par la société Quanterix  (https://www.quanterix.com)

La technologie

Des billes paramagnétiques couplées à un anticorps spécifique de la cible sont ajoutés à l'échantillon. Un anticorps dirigé contre la cible et capable de générer un produit fluorescent est ensuite ajouté. Un immunocomplexe constitué de la bille, de la protéine cible liée et de l'anticorps de détection est ainsi formé. A faible concentration, chaque bille ne sera liée qu'à une seule protéine cible ou à aucune. L'échantillon est ensuite chargé dans un disque SIMOA, constitué de 200.000 micropuits, chaque puits étant suffisamment grand pour accueillir une bille. La présence de fluorescence dans chaque puits est analysée.

 

Détection de molécules par électroluminescence :

La technologie MSD (Meso Scale Diagnostics) MULTI-ARRAY permet la détection de biomarqueurs, comme les cytokines, en format simplex ou multiplex en utilisant la dernière génération de détection par électroluminescence. 

Elle comporte de nombreux avantages en comparaison à la technique ELISA

  • Faible volume d’échantillon (10-25µl)
  • 10 analytes quantifiés en simultané
  • Gamme dynamique 3-4+ logs
  • Configuration à façon

Les kits de dosage pour la MSD sont revendus par Meso Scale Diagnostics (https://www.mesoscale.com).

Cet appareil a été acquis dans le cadre du CPER IBDLR.

La technologie

   
 Les électrodes en carbone des puits multiarray/multispots permettent l'attachement d'anticorps dirigés contre un analyte cible. La préscence de la cible est détectée par un second anticorps couplé à un SULFO-TAG. Lorsque de l'électricité est appliquée aux électrodes, le label SULFO-TAG émet de la lumière. L'intensité lumineuse est proportionnelle à la quantité d'analyte dans l'échantillon. La stimulation électrique étant découplée de la mesure (luminescence) le bruit de fond est très faible.  Le design des puits multiarray en 10 zones d'analyse (multispots) détectant des analytes différents permet de mutliplexer la mesure tout en gardant un faible volume d'échantillon. La rapidité de mesure et la sensibilité sont très importantes (ici données représentatives utilisant le kit TH1/TH2 10-Plex Assay.

  Que pouvons nous apporter?

Plusieurs prestations sont possibles :

  • Nous pouvons réaliser l’analyse complète pour toute personne désirant nous confier ses échantillons.
  • Nous pouvons également mettre à disposition nos appareils (location/temps machine).
  • Enfin, nous pouvons former tout personnel sur ces deux technologies.

 Dans tous les cas, contactez-nous pour discuter de vos projets.

 

Contacts :

Cette adresse e-mail est protégée contre les robots spammeurs. Vous devez activer le JavaScript pour la visualiser. (responsable, 04.67.33.04.20) & Cette adresse e-mail est protégée contre les robots spammeurs. Vous devez activer le JavaScript pour la visualiser. (Responsable Immunodosages et Biochimie,  04.67.33.71.73)

 

Références

  • Fortea J et al. Plasma and CSF biomarkers for the diagnosis of Alzheimer's disease in adults with Down syndrome: a cross-sectional study. Lancet Neurol. 2018 : 17(10):860-869
  • Hirtz C et al. Regulatory Context and Validation of Assays for Clinical Mass Spectrometry Proteomics (cMSP) Methods. Critical Reviews in Clinical Laboratory Sciences. 2018: 55(5):346-358
  • Vialaret J, et al. Towards a routine application of Top-Down approaches for Label-Free discovery Workflows. Journal of Proteomics. 2017: S1874-3919(17)30264-6.

 

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