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La banque de guides CrispR :

Millipore Sigma s'est associé à l'Institut Wellcome TrustSanger de Cambridge, en Angleterre, centre de recherche de renommée mondiale pour le séquençage, la bio-informatique et la biologie. L’institut Wellcome Trust Sanger a conçu cette banque, en s’appuyant sur ses bases de données de séquençage du génome et éviter les problèmes de SNP humains. Ceci permet d’utiliser cette banque dans de nombreuses lignées cellulaire.

 

Les règles de design des guides sont les suivantes:

  • Optimiser l’inactivation du gène en ciblant la première moitié de la séquence codante de la protéine
  • Cibler tous les transcrits
  • Éviter les 90 premières bases de la séquence codante où se trouvent les codons Start alternatifs
  • Cibler les séquences hautement conservées, en évitant les SNP, pour s’assurer de leur présence dans plusieurs lignées cellulaires.
  • Enfin, des règles strictes réduisent ou éliminent le potentiel d'effets off-target.

Tous les clones de Sanger ont respecté ces règles. La conception de Sanger exige au moins 3 paires de bases de mésappariement avec toute autre séquence du génome, de sorte que chaque paire de clones de la bibliothèque soit aussi spécifique que possible. Le vecteur Lenti-PB a été conçu par l’institut Wellcome Trust Sanger pour faciliter l'intégration stable dans le génome via un lentivirus de l'ADN de PB. Le vecteur lentiviral d’origine, utilisé par Koike-Yusa H. et al, a été modifié pour minimiser l’impact de la transcription par le promoteur U6 du sgRNA sur la production de lentivirus (le promoteur U6 a été cloné dans une orientation inverse par rapport au CMV promoteur). Par ailleurs, une répétition terminale inversée (ITR) du transposon PB a été insérée en amont de la cassette U6-gRNA-Pgk-Puro-T2A-BFP, tandis que la seconde était positionnée en aval de la 3 'LTR lentivirale.

 

 

Contact Banque Sanger :

Cette adresse e-mail est protégée contre les robots spammeurs. Vous devez activer le JavaScript pour la visualiser. (responsable, 04.34.35.97.19)

 

Autres prestations :

Sorties de clones des ORFeomes et clonage dans des vecteurs de destination

- ORFeomes humain avec ou sans codon stop :

  • CCSB 5.1 version
  • CCSB 8.1 version
  • CCSB 9 version (liste sur Cette adresse e-mail est protégée contre les robots spammeurs. Vous devez activer le JavaScript pour la visualiser.)
  • The Life Technologies ORFeome

- ORFeome de souris Biovalley

- ORFeome de levure S. cerevisiae GE Healthcare Dharmacon

MGC possède une banque de vecteurs d’expression eucaryote et procaryote compatible avec le système de clonage Gateway. Ces vecteurs permettent de réaliser des fusions avec différents tag en C ou N terminal sous contrôle de promoteurs plus ou moins forts.

Analyses d’échantillons ADN, ARN avec l’électrophorèse capillaire Labchip GX

 

Automatisation de protocoles à la carte avec le robot Tecan EVO 200

Le robot possède 8 aiguilles, 8 portes cônes, un gripper, un piège à vide ainsi que deux positions chauffantes. Des protocoles tels que la purification d’ADN plasmidique, de PCR, de clean-up, transcription in vitro fonctionnent en routine.

Des protocoles de génotypage de biopsies de souris ont été mis au point pour certains utilisateurs.

Contacts :

Cette adresse e-mail est protégée contre les robots spammeurs. Vous devez activer le JavaScript pour la visualiser. (responsable, 04.34.35.97.19), Cette adresse e-mail est protégée contre les robots spammeurs. Vous devez activer le JavaScript pour la visualiser. (04.34.35.97.20), Cette adresse e-mail est protégée contre les robots spammeurs. Vous devez activer le JavaScript pour la visualiser. (04.34.35.96.62).

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