Le contexte : pouvoir imager à haute résolution et manipuler simultanément l'activité cellulaire chez l'animal vivant

Le plateau IPAM (Imagerie du Petit Animal de Montpellier)-IGF  propose des approches d’imagerie intravitale à haute résolution intégrant un suivi longitudinal de l’animal  (chaque individu étant  son propre contrôle)  pour l’évaluation  de fonctions biologiques  normales ou altérées par la pathologie. Grâce à des financements de l’infrastructure d’avenir « France-Bioimaging » et les fondations FRC et Leducq, le plateau met à disposition de ces utilisateurs un microscope multiphotonique permettant de combiner simultanément l’imagerie cellulaire à haute résolution et la photo-activation sélective cellulaire chez l’animal vivant. Cet équipement est installé dans les locaux du plateau MARS.

L'équipement :

L’équipement est un microscope multiphotonique Fluoview FVMPE-RS conçu par la société Olympus. Ce microscope 2-photon est dédié à l’imagerie rapide intra-vitale (modèles murins anesthésiés ou éveillés en configuration « tête-fixée », poissons zèbre…) qui peut être simultanément couplée à une photo-activation ciblée (optogénétique, photo-ablation…). Le système est composé de deux lasers infrarouges pulsés femtoseconde, de longueur d’onde accordable de 650 à 1080 nm (Coherent) et de 680 à 1300 nm (Spectra Physics), respectivement. Les optiques d’introduction comprennent un modulateur acousto-optique (AOM) qui fournit un contrôle fin de la puissance des lasers et une unité d’auto-alignement sur 4 axes (X, Y qX, qY) qui corrige automatiquement le déplacement des lasers. Le système comprend également une unité scanner hybride qui combine un scanner galvanométrique pour l’imagerie avec un haut rapport signal/bruit et un scanner résonnant pour l’imagerie à haute vitesse (30 images par seconde à 512x512 pixels). Le système de détection est composé de 4 photomultiplicateurs (PMT) pour lumière réfléchie en mode non déscanné, dont deux PMT Multi-Alkali « classiques » et deux PMT Gallium-Arsenide-Phosphide (GaAsP) ultra-sensibles. Deux autres PMT sont disposés de manière à détecter la lumière transmise et permettent de réaliser de l’imagerie en seconde (SHG) ou troisième harmonique (THG). Le microscope est fourni avec un panel d’objectifs haute définition ainsi que des objectifs à grande distance de travail (8-20 mm). Ces derniers sont également utilisables sur tissus transparisés.

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